在室溫中
植物ELISA檢測試劑盒操作的流程事項
植物ELISA檢測試劑盒操作步驟
各試劑在使用前平衡至室溫。
1.加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。除空白孔外,余孔分別加標準溶液或待測樣品100ul,注意不要有氣泡,輕輕混勻,酶標板加上蓋,37℃反應120分鐘。
2.棄去液體,甩干,不用洗滌。
3.每孔加檢測溶液A工作液100ul,37℃,60分鐘。洗板3次,350ul/每孔,甩干。
4.每孔加檢測溶液B工作液100ul,37℃,60分鐘,洗板5次,甩干。
5.依序每孔加底物溶液90ul,37℃避光顯色30分鐘(此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯)。
6.依序每孔加終止溶液50ul,終止反應(此時蘭色立轉黃色)。用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。
植物ELISA檢測試劑盒注意事項:
1.洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。
2.一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
3.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。
4.如標本中待測物質含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請zui后乘以稀釋倍數。
5.在配制標準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。
6.底物請避光保存。